Gene Quantification - 9781461286820

Genetikai ir molekuliniai biologai jau daugelį metų ir dėl įvairių priežasčių domisi kiekybiniu genų ir jų produktų kiekiu (Bishop, 1974). Ankstyvieji molekuliniai metodai buvo pagrįsti molekuline hibridizacija ir buvo sukurti netrukus po to, kai Marmuras ir Doty (1961) pirmą kartą parodė, kad dvigubos spiralės denatūraciją galima pakeisti – kad molekulinės reasociacijos procesas labai priklauso nuo sekos. Gillespie ir Spiegelman (1965) sukūrė metodą, kaip titruoti zondo kopijų skaičių tikslinėje sekoje, kurioje tikslinė seka buvo pritvirtinta prie membranos atramos prieš hibridizaciją su zondu – paprastai RNR. Taigi tai buvo daugelio šiandien vis dar naudojamų ir iš tikrųjų kuriamų metodų pirmtakas. Ankstyvieji šių metodų taikymo pavyzdžiai apėmė kopijų skaičiaus matavimą genų šeimose, tokiose kaip ribosomų genai ir imunoglobulino šeima. Šiuo metodu buvo aptikta genų amplifikacija navikuose ir atsakas į gydymą vaistais. Tuo pačiu laikotarpiu buvo išrasti genų skaičiaus įvertinimo metodai, pagrįsti reasociacijos proceso kinetika – vadinamoji Cot analizė. Šis metodas, išnaudojantis reasociacijos greičio priklausomybę nuo dviejų grandžių koncentracijos, atskleidė pasikartojančių sekų buvimą aukštesniųjų eukariotų DNR (Britten ir Kohne, 1968). RNR gausai mišrioje populiacijoje matuoti buvo naudojamas pritaikymas RNR, Rot analizė (Melli ir Bishop, 1969).